通常影響色譜柱使用壽命的主要因素有以下幾點(diǎn)。
①色譜柱破損
石英毛細(xì)管柱的聚酰亞胺層,如有少許破損就很難再保護(hù)脆弱的石英毛細(xì)管。當(dāng)柱箱連續(xù)地加熱和冷卻、柱箱風(fēng)扇的震動(dòng)和柱架等都會(huì)對(duì)毛細(xì)管造成應(yīng)力,zui終在色譜柱有弱點(diǎn)處破裂。大內(nèi)徑柱更容易破裂,也就是說(shuō),在操作0.45~0.53mm內(nèi)徑柱時(shí),要比0.18~0.32mm內(nèi)徑柱更要小心。
如果已經(jīng)斷裂的色譜柱,仍在高溫下連續(xù)運(yùn)行或是作多階溫度程序運(yùn)行,很可能損壞色譜柱,因破裂的后半段暴露在高溫的氧氣中,這樣會(huì)很快地破壞固定相;而斷裂的前半段,由于有載氣流過(guò),氧的影響會(huì)小些。如斷裂的色譜柱沒(méi)有再加熱或只暴露在高溫或空氣中很短時(shí)間,斷裂的后半部分不會(huì)受到明顯損壞,可考慮作為它用。
②熱損傷
超過(guò)色譜柱溫度上限,會(huì)造成色譜柱固定相和管表面加速損壞,色譜柱的過(guò)量流失會(huì)使活性組分拖尾,降低柱效。一般熱損壞是一個(gè)很慢的過(guò)程,但有氧存在時(shí),會(huì)大大加速熱損壞。另外在有漏氣情況下,色譜柱過(guò)熱也會(huì)加速損壞或*性損壞色譜柱。
③氧損傷
氧是毛細(xì)管柱的大敵,在接近室溫下,不會(huì)對(duì)色譜柱有太大損害,柱溫升高時(shí)會(huì)嚴(yán)重?fù)p壞色譜柱。對(duì)于極性固定相,即使溫度和氧濃度很低時(shí),也會(huì)發(fā)生嚴(yán)重?fù)p壞。雖然,短時(shí)間地暴露在空氣中,如注射空氣或更換隔墊不會(huì)有太大問(wèn)題,但也應(yīng)避免。
在氣路上有漏氣的地方(如氣路、接頭和進(jìn)樣器),往往是進(jìn)入氧氣的源頭,當(dāng)色譜柱加熱時(shí),就會(huì)很快地?fù)p壞固定相,會(huì)過(guò)早地引起固定液的過(guò)度流失,至使活性化合物有拖尾,降低柱效。在不太嚴(yán)重的情況下,色譜柱還會(huì)有一定的分離功能,但柱效已經(jīng)下降。在嚴(yán)重的情況下,色譜柱就會(huì)*失效。
④化學(xué)損傷
有少數(shù)化合物會(huì)使固定相遭到破壞。不揮發(fā)性化合物,進(jìn)入色譜柱常常會(huì)降低色譜柱的性能,但是不會(huì)破壞固定相,有條件時(shí)這些沉積的殘留物可以用溶劑沖洗而除去,能恢復(fù)色譜柱的性能。
要避免進(jìn)入色譜柱的主要化合物是無(wú)機(jī)和礦物堿和酸,這些礦物堿和酸不會(huì)揮發(fā),通常積累在色譜柱的前端,如果使其停留在那里就會(huì)破壞固定相,使色譜柱過(guò)早的大量流失,使活性化合物拖尾,以及使柱效下降,其征兆和熱損壞及氧損壞類似。
由于化學(xué)損壞多發(fā)生在色譜柱的前端,所以可把色譜柱的前端切掉0.5~1m,在比較嚴(yán)重的情況下,可以截去 5m 或更長(zhǎng)的一段。如果使用保護(hù)柱就會(huì)減小色譜柱被損害的長(zhǎng)度,但是需要經(jīng)常處理或更換保護(hù)柱。酸或堿還常常會(huì)破壞石英管內(nèi)的去活表面,因而會(huì)引起活性化合物的峰形變壞。
⑤污染
氣相色譜中,毛細(xì)管色譜柱被污染是很普遍的問(wèn)題,不幸的是,它和各種各樣常見(jiàn)的故障相似,常常被錯(cuò)誤的判斷為其它的故障,雖然被污染了的色譜柱并沒(méi)有損壞,但已失去效能。通常有兩種基本類型的污染物,不揮發(fā)性污染物和半揮發(fā)性污染物。不揮發(fā)性污染殘留物不能從色譜柱里洗脫出來(lái),而是累計(jì)在色譜柱里,這樣它就成為涂漬了殘留物的色譜柱,因而影響溶質(zhì)的分配。而且殘留物還會(huì)和活性化合物相互作用,甚至造成峰的拖尾,減少峰面積。
活性溶質(zhì)是指那些含有羥基或氨基(一些硫醇基)及醛的物質(zhì);半揮發(fā)性污染物zui后會(huì)洗脫出去,但需要幾個(gè)小時(shí)或幾天時(shí)間,半揮發(fā)性污染物和不揮發(fā)性殘留物一樣,他們也會(huì)引起峰形變壞和峰面積減小。此外,還常常引起基線不穩(wěn)定(漂移、噪音增加)或出鬼峰等。
污染物的來(lái)源有許多,其中進(jìn)樣是zui主要的來(lái)源。生物液體和組織、土壤、廢水、地下水和類似的含有大量半揮發(fā)的和不揮發(fā)物質(zhì)的基體,甚至使用凈化方法,樣品也會(huì)含有少許這些物質(zhì)并帶到注射樣品中,幾次到幾百次進(jìn)樣就會(huì)造成殘留物的積累故障。柱上進(jìn)樣、不分流進(jìn)樣和大口徑柱直接進(jìn)樣等進(jìn)樣方法常常會(huì)造成上述色譜柱的嚴(yán)重污染。
污染物還會(huì)來(lái)源于氣體管路、凈化器、密封墊、隔墊的碎屑或其他與樣品可能接觸的物質(zhì),如樣品瓶、溶劑、注射器、移液管等,這些類型的污染物可能會(huì)突然性的引起故障。
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